SNAP-tag, CLIP-tag, ACP/MCP-tag- die neue antikörperfreie Technologie für dieUntersuchung von Proteinfunktion und -lokalisation!
| 
|
Die neue Protein-Labeling-Technologie von NEB bietet Ihnen eine einfache, schnelle und zuverlässige Methode zur antikörper-freien Markierung Ihres Zielproteins für unterschiedliche in vivo und in vitro Applikationen: - Markierungen mit einem Fluoreszenz-Farbstoff für bildgebende Verfahren in der lebenden Zelle
oder
- Immobilisierung Ihres Proteins für Beads für in vitro Studien
- dieses sind nur zwei Beispiele für Applikationen der neuen SNAP-tag Technologie.
| Das Prinzip ist so einfach wie clever:
Sie exprimieren Ihr Zielprotein als Fusion mit einem der neuartigen Protein (Enzym)-tags. Dieser bindet dann kovalent und hochspezifisch sein jeweils definiertes Substrat, das die von Ihnen gewünschte Modifikation, z.B. ein Fluorochrom, trägt.
Haben Sie Ihr (Fusions-)Protein einmal kloniert, so können Sie durch die Wahl des Labels unterschiedlichste Applikationen realisieren.
|
| |
SNAP-tag Applikationen:
- Fluoreszenzmikroskopie: Einzel- und Mehrfach- Färbungen in lebenden oder fixierten Zellen, intra- wie auch extrazellulär z.B. für
- Proteinlokalisation und -translokation,
Rezeptor-Internalisierung etc. - Pulse/Chase Studien in lebenden Zellen
- Selektive Zelloberflächen-Markierung
- Durchflusszytometrie
- Proteinimmobilisation, Pull-Down Assays, Proteinarrays, Aufreinigung
- Direkte Proteindetektion in SDS-PAGE
- Protein-Bindestudien, z.B. im Hochdurchsatz/Mikrotiterplatten
- FRET/HTRF-Assays, Biosensor-Interaktionsexperimente
- etc., etc.
| Bsp: Imaging mit der SNAP-tag Technologie
1. Klonieren Sie Ihr Zielprotein in den Expressionsvektor.
2. Transfizieren Sie das Plasmid und exprimieren so Ihr Fusionsprotein in der Wirtszelle.
3. Geben Sie das Markierungssubstrat Ihrer Wahl dazu
4. Die Markierung wird sofort vom SNAP-tag gebunden und kovalent mit dem Zielprotein verknüpft: so ist Ihr Zielprotein
in der Fluoreszenzmikroskopie "sichtbar". (Klicken Sie hier für eine größere Abbildung)
| |
Weitere nützliche Links:
|
|
drücken Sie bitte die rechte Maustaste, 1.8 MB)