Cyclic AMP und GMP XP® Assay Kits

Die Cyclic AMP und Cyclic GMP XP™ Assay Kits von Cell Signaling Technology sind ideal zur Quantifizierung von zyklischen Nukleotiden in einer Zellprobe, z.B. bei der Aktivitätsmessung von G-Protein gekoppelten Rezeptoren (GPCRs).

Unsere „ready-to-use“ Enzyme-Immuno-Assays bieten Ihnen im praktischen 96-well Format ein extrem zuverlässiges System und alle notwendigen Komponenten zur genauen Quantifizierung von zyklischen Nukleotiden in Ihrer Probe.

Prinzip des Assays:
Zyklische Nukleotide aus Ihren Proben (in Schemazeichnung rechts mit A markiert) konkurrieren mit einer definierten Menge an HRP-konjugierten Nukleotiden (B) aus dem Kit um die Bindung an einen immobilisierten, hochspezifi schen anti-cAMP bzw. anti-cGMP monoklonalen XP™ Capture-Antikörper (C). Mit Hilfe eines HRP-abhängigen TMB-Farbumschlags bzw. Chemilumineszenz-Detektion quantifizieren Sie anschließend die Menge an gebundenem HRP-cAMP und errechnen so die Menge des cAMP in Ihrer Probe. Die Absorption ist invers proportional zur Menge
an zyklischen Nukleotiden in den untersuchten Proben.

Beispiel:
Sie mischen Ihr Zelllysat mit einer definierten Menge an HRP-cAMP. Haben Sie wenig cAMP in Ihrer Probe, so wird vermehrt das HRP-konjugierte cAMP des Kits gebunden und Sie messen eine hohe Absorption. Befindet sich jedoch viel cAMP in Ihrer Probe, so bindet der anti-cAMP XP Antikörper vermehrt unmarkiertes cAMP aus Ihren Zellen und nur wenig HRP-konjugiertes cAMP aus dem Kit. Die gemessene Absorption ist somit gering. Mittels einer Standardkurve mit definierten Mengen an HRP-cAMP errechnen Sie die genaue Menge an cAMP in Ihrer Probe.

Ihr Vorteil:
  • Einfache Handhabung
  • Höchste Spezifität und Sensitivität
  • Exzellente Reproduzierbarkeit

Abb.1 & Abb.2: Quantifizierung der cAMP-Konzentration von Isoproterenol behandelten HEK293-Zellen mit dem Cyclic AMP XP™ Assay Kit #4339.
HEK293-Zellen wurden mit einer Dichte von 3x104 Zellen/well in einer 96-well Platte ausplattiert und über Nacht inkubiert. Die Zellen wurden mit 0.5 mM IBMX für 30 Minuten vorbehandelt, anschließend für 3 min mit Isoproterenol inkubiert und mit 1X Cell Lysis Buffer#9803 lysiert. Isoproterenol ist ein Agonist des β-Adrenoceptors und aktiviert den β-2 adrenergen Rezeptor (ADRB2), der in HEK293 Zellen endogen exprimiert wird. Die Aktivierung von ADRB2 führt subsequent zur Aktivierung der Adenylat-Zyklase und so zur Synthese von cAMP als Second Messenger. Die gemessenen Absorptionswerte (Abb.1) und die errechnete Aktivität in Prozent (Abb. 2) sind oben gezeigt.

Abb. 3: Standardkurve cGMP aus #4360
Der cGMP Standard des Kits wurde in 1X Cell Lysis Buffer #9803 verdünnt und mit dem Cyclic GMP XP™ Assay Kit #4360 quantifiziert. Er dient als Referenzwert für jede Messung.
Cyclic Nucleotide EIA Kits
Artikel-nummer Beschreibung Listenpreis
4339 S Cyclic AMP XP® Assay Kit 330,- €
4360 S Cyclic GMP XP® Assay Kit 330,- €
8019 S Cyclic AMP XP® Chemiluminescent Assay Kit 330,- €
8020 S Cyclic GMP XP® Chemiluminescent Assay Kit 330,- €