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Isothermale Amplifikation – Polymerasen

Für die meisten isothermalen Applikationen (inkl. LAMP) empfehlen wir die Bst 2.0 und Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerasen.

Bst 2.0 DNA Polymerase

Die Bst 2.0 DNA Polymerase sowie die Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase sind gentechnisch veränderte, funktionsoptimierte Homologe des Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, Large Fragment und besitzen als solche eine 5´→3´ DNA Polymerase Aktivität bei starkem „strand displacement“, aber keine 5´→3´ Exonuklease Aktivität.

Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase

Zur Verbesserung der Spezifität besitzt die Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase eine zusätzliche Aptamer-basierte „Warmstart“-Modifikation: analog zu Hot Start Modifikationen bei PCR Polymerasen inhibieren die Apatamere die Enzymaktivität der Bst 2.0 unterhalb der optimalen Reaktionstemperatur von 50 °C und verhindern so den unspezifischen Einbau von dNTPs bei Raumtemperatur. Die Aptamere dissoziieren automatisch mit Erreichen des Reaktionsoptimums und geben die Enzymaktivität frei.

Cover-FeatureArticle_ImprovedIsoAmpReagents

„Improved Reagents for
Isothermal DNA Amplification“

Original-Artikel von
Dr. Nathan Tanner,
New England Biolabs Inc.

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Vergleich mit Wildtyp Bst DNA Polymerase

NEB_Bst_Performance

Strand Displacement Amplification (SDA) des BRCA1-Gens aus HeLa gDNA unter jeweils optimierten Bedingungen. Bst 2.0 ist deutlich prozessiver und schneller und erreicht den Schwellenwert früher als die herkömmliche Wildtyp Bst DNA Polymerase, large Fragement (Abb. links), sogar unter Hochsalz-Bedingungen (Abb. rechts).

Beide Bst 2.0 DNA Polymerasen zeigen gegenüber dem herkömmlichen Wildtypenzym eine deutliche Steigerung in der Geschwindigkeit und den Reaktionsausbeuten, eine größere Salz/Puffer-Toleranz sowie eine erhöhte Thermostabilität – kurz um: „engineered for performance!“

Ihre Vorteile:
  • Verbesserte Designer-Enzyme ``engineered for performance``
  • Höhere Geschwindigkeit
  • Erhöhte Thermostabilität
  • Gesteigerte Salz/Puffer-Toleranz
  • Höhere Ausbeuten

Neu: Bst 3.0 DNA Polymerase – optimal für LAMP und RT-LAMP

Die Bst 3.0 DNA Polymerase ist ein in silico-konstruiertes, verbessertes Homolog der Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, Large Fragment. Es wurde von NEB funktionsoptimiert und bietet deutlich verbesserte Performance bei der isothermalen Amplifikation bei gleichzeitiger Steigerung der Reversen Transcriptase Aktivität.
Bst 3.0 DNA Polymerase besitzt eine starke 5´→3´ Polymerase Aktivität sowohl auf DNA als auch auf RNA sowie eine starke „strand displacement“, aber keine 5´→3´ Exonuklease und 3’→5´Aktivität.
Das Enzym ist besonders zuverlässig und deutlich toleranter gegen bekannte Inhibitoren, wie z.B. hohe Salz-Konzentrationen
– kurz um: „engineered for performance!“

Die überlegenen Eigenschaften der Bst 3.0 DNA Polymerase machen das Enzym zur ersten Wahl bei all Ihren (RT)-LAMP Experimenten.

Fast, single-enzyme RT-LAMP can be performed using Bst 3.0  RT-LAMP was performed using indicated DNA polymerase and Jurkat total RNA and primers for two genes (ACTB, left; HMBS2, right). Fastest results were observed with a 2-enzyme system, Bst 2.0 and WarmStart RTx, but robust amplification was also observed using Bst 3.0 without additional RT. Bst LF, Bst 2.0 and competitor enzymes showed highly variable performance, with slow threshold times or reaction failure on one of the two targets.

Sie sind sich nicht sicher, welche Polymerase Sie
für Ihre isothermale Amplifikation benötigen?

Eine Übersicht und Hintergrundinformationen zur Isothermalen Amplifikation haben wir für Sie im aktuellen Spezialkatalog zusammengefasst.

Bestellinformationen

PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
Bst 2.0 DNA Polymerase M0537S/L 1.600 / 8.000 u  68 € / 272 € NEB Shop_icon
Bst 2.0 DNA Polymerase, high conc. M0537M 8.000 u 272 €  NEB Shop_icon
Bst 2.0 Warmstart DNA Polymerase M0538S/L 1.600 / 8.000 u  76 € / 304 € NEB Shop_icon
Bst 2.0 Warmstart DNA Polymerase, high conc. M0538M 8.000 u 304 € NEB Shop_icon
Bst 3.0 DNA Polymerase M0374S/L 1.600 / 8.000 u 69 € / 277 €  NEB Shop_icon
Bst 3.0 DNA Polymerase, high conc. M0374M 8.000 u 277 €  NEB Shop_icon
Isothermal Amplification Buffer Pack B0537S 6 ml 25 €  NEB Shop_icon

Passend dazu:

PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
Deoxynucleotide Solutions, Mix N0447S 8 µmol each 59 € NEB Shop_icon
Deoxynucleotide Solutions, Mix N0447L 40 µmol each 236 € NEB Shop_icon

Stand: 02.01.2017

Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com