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Reverse Transkription / cDNA Synthese

ProtoScript® II Reverse Transcriptase

NEBs ProtoScript II Reverse Transcriptase ist eine rekombinante, mutierte Version der M-MuLV RTase mit reduzierter RNase H-Aktivität und erhöhter Temperaturstabilität. Die ProtoScript® II Reverse Transcriptase ermöglicht besonders lange cDNAs bis über 10 kb (full length transcripts). Durch die Erweiterung des Temperaturspektrums (bis auf 48°C ! ) können auch schwierige RNA- Sekundärstrukturen (z.B. in 3’ UTRs) zuverlässig und in hohen Ausbeuten in cDNA umgeschrieben werden.

Ihre Vorteile:
  • cDNA Transkripte bis über 10 kb mit hohen Ausbeuten
  • Erhöhte Thermostabilität (bis 48°C !)
  • Exzellente Sensitivität (Input Total RNA < 1pg)
  • Optimal auch für schwierige RNA-Templates mit erhöhten Sekundärstrukturen!
  • Kompatibel mit subsequenten RT-PCR oder qPCR Ansätzen

Die ProtoScript® II Reverse Transcriptase von NEB zeichnet sich außerdem durch eine exzellente Sensitivität aus. So ist z.B. eine Input-Menge von weniger als 1 pg Total RNA (oder 5 RNA Moleküle einer spezifischen mRNA) für eine erfolgreiche RT-PCR notwendig.

Fazit: ProtoScript® II Reverse Transcriptase von NEB ist ideal für alle Anwendungen, in denen zuverlässig und in hohen Ausbeuten full-length cDNA benötigt werden (z.B. Klonierungen, RT-PCR, qPCR, etc.).

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Performance

Die neue ProtoScript® II Reverse Transcriptase von NEB: Vergleichbare oder bessere Performance im Vergleich zu Mitbewerbern

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1 µg Total RNA (aus Jurkat Zellen) wurde für eine Erststrang-cDNA Synthese eingesetzt (20 µl Gesamtvolumen). Alle Reaktionskomponenten (mit Ausnahme der RTase) wurden gemischt und dem Protokoll entsprechend für 3 min vorinkubiert. Es wurden 200 units von NEB’s ProtoScript® II Reverse Transcriptase (A) oder SuperScript® II (B) hinzugefügt und für 50 min wie in Abbildung angegeben bei unterschiedlichen Temperaturen inkubiert und anschließend für 5 min bei 80°C Hitze-inaktiviert. 1 µl der gewonnenen cDNA diente als Template für eine 25 µl Kontroll-PCR (35–40 Zyklen) mit LongAmp® Hot Start Taq 2X Master Mix. Marker M ist die Quick-Load® 2-Log DNA Ladder.

Schwierige Templates

Zuverlässige cDNA Synthese auch bei langen Templates

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1 µg Total RNA (aus Jurkat Zellen) wurde für eine Erststrang-cDNA Synthese mit 200 units ProtoScript® II Reverse Transcriptase eingesetzt (20 µl Gesamtvolumen). Die Synthese wurde für 50 min bei 42°C durchgeführt und anschließend für 5 min bei 80°C Hitze-inaktiviert. 1 µl der gewonnenen cDNA diente als Template für eine 25 µl Kontroll-PCR (35–40 Zyklen) mit LongAmp® Hot Start Taq 2X Master Mix. Marker L ist die Quick-Load® 2-Log DNA Ladder.

Hochqualitative cDNA sogar bei geringsten Mengen an RNA Ausgangsmaterial

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Abnehmende Mengen an Jurkat Total RNA (1 μg – 1 pg) wurden für eine Erststrang-cDNA Synthese mit 200 units ProtoScript® II Reverse Transcriptase eingesetzt (20 µl Gesamtvolumen). Die Synthese wurde für 50 min bei 42°C durchgeführt und anschließend für 5 min bei 80°C Hitze-inaktiviert. 1 µl der gewonnenen cDNA diente als Template für eine 25 µl Kontroll-PCR (40 Zyklen) mit LongAmp® Hot Start Taq 2X Master Mix. Die Bande bei 0,6 kb ist eine spezifische Amplifikation der GAPDH cDNA. Marker L ist die Quick-Load® 2-Log DNA Ladder.

ProtoScript® II Reverse Transcriptase ist extrem sensitiv

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Abnehmende Mengen an Luciferase mRNA (109 bis 102) Moleküle wurden in Gegenwart von 1 ng Jurkat Total RNA in cDNA umgeschrieben (50 units ProtoScript® II Reverse Transcriptase ) 20 µl Gesamtvolumen. 1 µl des cDNA Produktes wurde mit dem qPCR Kit SsoAdvanced™ SYBR® Green Supermix analysiert. Der Nachweis von lediglich 5 Molekülen Luciferase mRNA belegt die exzellente Sensitivität der cDNA Synthese mit der NEB ProtoScript® II Reverse Transcriptase.

Bestellinformationen

PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
ProtoScript® II Reverse Transcriptase M0368S 4.000 u 78 € NEB Shop_icon
M0368L 10.000 u 156 €
M0368X 40.000 u 561 €
ProtoScript® II First Strand cDNA Synthesis Kit E6560S 30 rxns 160 € NEB Shop_icon
E6560L 150 rxns 640 €
PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
AMV Reverse Transcriptase (active up to 60°C!) M0277S 200 u 71 € NEB Shop_icon
M0277T 500 u 159 €
M0277L 1.000 u 284 €
M-MuLV Reverse Transcriptase (Rnase H+) M0253S 10.000 u 69 € NEB Shop_icon
M0253L 50.000 u 276 €
Murine RNase Inhibitor M0314S 3.000 u 71 € NEB Shop_icon
M0314L 15.000 u 284 €

 

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PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
Deoxynucleotide Solution Set N0446S 25 µmol each 160 € NEB Shop_icon
Deoxynucleotide Solutions, Mix N0447S/L 8 µmol / 40 µmol each 59 € / 236 € NEB Shop_icon

Stand: 02.01.2017

Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com