Zellfreie Proteinexpression mit dem NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System
Mit dem NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System können in vitro große Mengen Protein in kurzer Zeit synthetisiert werden.
Das NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System ist ein kombiniertes Transkriptions-/ Translationssystem für die Proteinsynthese, ausgehend von einem DNA Template mit T7 Promotor. Es sind alle für die in vitro Protein Synthese nötigen Komponenten enthalten. Die Kombination aus einem besonders aktiven Zellextrakt (isoliert aus einem speziell entwickelten E. coli Stamm), einer optimierten T7 RNA Polymerase und dem entsprechenden Puffer ermöglicht die unkomplizierte Expression verschiedenster Proteine zwischen 17 und 230 kDa Größe in kurzer Zeit (2 – 4 Stunden).
- Hohe Ausbeuten: Synthetisieren Sie hohe Ausbeuten Ihres Zielproteins (in der Regel ~0.5 mg/ml)
- Geschwindigkeit: Erhalten Sie Ihr Zielprotein in nur 2–4 h
- Vielfältig: Einsetzbar für Proteine von 17 bis 230 kDa
- Praktisch: Starten Sie mit kodierender Plasmid DNA, linearer DNA, oder mRNA
- Umfassend: RNase inhibitor bereits inkludiert
- Einfach skalierbar: Nutzen Sie das System im analytischen Miniatur-Maßstab oder im Produktions-Maßstab für mehrere Milligramm an Zielprotein
Durch die hohe Reaktionsgeschwindigkeit und die einfache Anwendbarkeit ist das System besonders gut für Protein Engineering, Mutagenese Studien oder Enzym-Screenings geeignet. Die synthetisierten Proteine können auch für biophysikalische und strukturelle Analysen verwendet werden.
Die synthetisierten Proteine können ohne Aufreinigung direkt mittels SDS-PAGE und/ oder Western Blot analysiert, oder direkt in funktionale Assays eingesetzt werden. Nach Aufreinigung z.B. mittels IMAC können weitere Versuche zur strukturellen oder funktionalen Charakterisierung erfolgen.
Video: NEBExpress Cell-free E. Coli
Protein Synthese mit dem NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System
50 µl Protein Synthese Reaktionen mit 250 ng Template DNA wurden für 3 Stunden bei 37°C inkubiert. Je 2 µl wurden pro Reaktion auf ein 10 – 20 % Tris-Glycin Gel aufgetragen und per SDS-PAGE analysiert. Die roten Punkte markieren jeweils das exprimierte Protein. M = Unstained Protein Standard, Broad Range #P7717, “Neg” = Negativ-Kontrolle ohne DNA Template
Verfügbare NEBExpress Cell-free Produkte:
| PRODUKT | Art. # | GRÖSSE | INFO | ||
|---|---|---|---|---|---|
| NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System | E5360S | 10 rxns |  |
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| E5360L | 100 rxns | |
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| Passend dazu: | |||||
| NEBExpress GamS Nuclease Inhibitor | P0744S | 75 µg | |
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| PURExpress Disulfide Bond Enhancer | E6820S | 50 rxns | |
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Stand: 01.01.2024
Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.
