NEBExpress MBP Fusion and Purification System

Das neue NEBExpress MBP Fusion and Purification System nutzt den für Proteinexpression in E. coli optimierten Ptac Promoter in Kombination mit der Sequenz des Maltose-Binding-Protein (MBP).

Das resultierende MBP-Fusionsprotein kann in großen Mengen im Cytoplasma von E. coli exprimiert werden. Das MBP-Tag dient dabei zum einen der einfachen Aufreinigung über ein Amylose Säule, erhöht aber auch die Löslichkeit des Proteins in der Zelle. So entstehen deutlich weniger Probleme mit unlöslichen Produkten, wie z.B. „inclusion bodies“.

NEBExpress MBP System - Workflow

NEBExpress MBP Fusion and Purification System

Der im NEBExpress MBP Fusion and Purification System enthaltene Vektor pMAL-c6T codiert für ein His-getaggtes MBP gefolgt von einer Multiple Cloning Site. Diese enthält die Sequenz für eine TEV Protease Schnittstelle sowie Stop-Codons für alle 3 möglichen Reading Frames.

Nach Expression des MBP-Fusionsproteins in E. coli erfolgt die erste Aufreinigung mit Hilfe einer Amylose-Matrix, an welche das MBP reversibel bindet. Kleinere Proteinmengen können direkt aus 200 – 500 µl Zellkulturüberstand isoliert werden. Werden große Proteinmengen benötigt, so können diese durch die Lyse der Zellen aus bis zu einem Liter Bakterienkultur gewonnen werden.

Das isolierte Protein wird durch Zugabe von Maltose schonend von der Säule eluiert. Anschließend kann mittels TEV Protease Verdau das MBP Affinitäts-Tag vom Zielprotein abgespalten werden. Die mitgelieferte TEV Protease trägt, wie das MBP auch, ein His-Tag. Eine abschließende Aufreinigung über eine Nickel-Matrix entfernt die TEV Protease und das MBP und Sie erhalten ein hochreines, Tag-freies Zielprotein.

Ihre Vorteile:
  • Hohe Expressionsausbeuten von bis zu 100 mg / Liter Bakterienkultur
  • Erhöhte Löslichkeit des exprimierten Proteins durch Fusion mit MBP
  • Hochreines und Tag-freies Protein durch Two-Step Aufreinigung
  • Schonende Elution ohne Detergentien / Denaturierung

Das NEBExpress MBP Fusion and Purification System enthält alle notwendigen Reagenzien für den Standard-Workflow:

  • pMAL-c6T Vector
  • Amylose Resin
  • TEV Protease (inkl. Reaktionspuffer)
  • Antikörper und Kontrollprotein für Western Blot Analyse
  • E. coli NEB Express
PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
NEBExpress MBP Fusion and Purification System E8201S 1 Kit 650 € NEB Shop_icon NEB Info_icon

Zusätzlich erhältlich:

PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
Amylose Magnetic Beads E8035S 25 mg 252 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
Amylose Resin E8021S 15 ml 199 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
Amylose Resin E8021L 100 ml 1038 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
Amylose Resin High Flow E8022S 15 ml 262 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
Amylose Resin High Flow E8022L 100 ml 1570 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
NEBExpress Ni-NTA Magnetic Beads S1423S 1,0 ml 190 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
NEBExpress Ni-NTA Magnetic Beads S1423L 5,0 ml 899 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
NEBExpress Ni Spin Columns S1427S 10 columns 105 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
NEBExpress Ni Spin Columns S1427L 25 columns 210 € NEB Shop_icon NEB Info_icon
NEBExpress Ni Resin S1428S 25 ml 300 € NEB Shop_icon NEB Info_icon

Stand 10.03.2020

Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.