Golden Gate Assembly

Golden Gate Assembly ermöglicht es, effektiv DNA Fragmente ohne störende, zusätzliche Basen an den Übergängen zu verbinden.

Die Methode macht sich die Eigenschaften von Typ IIS Restriktionsenzymen zu Nutze, welche an definierten Positionen außerhalb ihrer definierten Konsensussequenz schneiden. So entsteht ein Überhang aus Kontext-abhängigen, „beliebigen“ Nukleotiden, der komplementär zum gewünschten Bindungspartner sein muss – die ursprüngliche Erkennungssequenz fällt raus. Die benötigten Typ IIs Schnittstellen und komplementären Basen im Ligationsübergang der verwendeten Vektoren und Inserts bringen Sie dabei selbst durch High-Fidelity PCR ein.

Golden Gate Assembly Overview
Ihre Vorteile:
  • Schnelle, gerichtete und nahtlose Multiplex-DNA-Klonierung
  • Einsetzbar bis über 20 Fragmente unterschiedlicher Größen (von unter 100 bp bis über 15 kb) und GC-Gehalt
  • Neue Enzymentwicklungen verfügbar optimiert für Golden Gate Assembly
  • NEB Golden Gate Assembly Tool für einfaches Primerdesign kostenfrei verfügbar

20+ Fragmente gleichzeitig gerichtet klonieren – Mit NEBs Golden Gate Produkten

NEBs Forschungsabteilung hat kürzlich durch intensive Enzymoptimierungen und einem verbesserten Verständnis der Sequenz-Präferenzen der Enzyme erstmals 24 DNA Fragmente simultan mit >90% Effizienz gerichtet kloniert. Damit ist die Tür weit aufgestoßen für neue Einsätze dieser Hochdurchsatz-Technologie.

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Golden Gate ermöglicht so die spezifische Assemblierung mehrerer Fragmente ohne artifizielle Basen an den Überhängen. Die Genauigkeit hängt dabei von der Länge der überlappenden Bereiche ab. Daher werden für die Methode solche Typ IIS Restriktionsenzyme bevorzugt, die 4 Basen Überhänge erzeugen, wie BsaI/BsaI-HFv2BbsI/BbsI-HFBsmBI und Esp3I.

NEB bietet mehr Type IIS Restriktionsenzyme an als andere Anbieter. Die meisten dieser Enzyme werden auch für Golden Gate Assembly verwendet. Für Informationen zu allen Type IIS Restriktionsenzymen, nutzen Sie unsere Type IIS Restriktionsenzym Tabelle. Diese erlaubt Ihnen die Sortierung unserer Enzyme nach Eigenschaften zum einfachen Vergleich.

Unser Golden Gate Assembly Tool hilft Ihnen beim Design der Überhänge und stellt sicher, dass die Erkennungssequenz des gewählten Restriktionsenzyms nicht in einer der Zielsequenzen vorkommt.

Golden Gate Assembly Tool

Golden Gate Assembly Workflow

Sehen Sie wie Golden Gate schnell eine große Anzahl von DNA Fragmenten assembliert.

Restriktionsenzyme im Golden Gate Assembly

Unsere Typ IIS Restriktionsenzyme haben beides: Erkennungs- und Bindestellen. Sie schneiden unterhalb der Erkennungssequenz und erzeugen hier einen 4 Basen langen Überhang, der sich optimal zur Reassemblierung eignet.
Finden Sie hier eine Liste unserer Typ IIS Enzyme.

Mehr Video Tutorials finden Sie auf NEBs YouTube Kanal.

Golden Gate Workflow für komplexe Assemblierungen

Golden Gate Assembly Overview

Golden Gate Assemblierung von 24 Fragmenten: effizient und genau

Die Assemblierung von 24 Fragmenten aus der lac/lacZ Kassette wurde anhand des Protokolls aus dieser Publikation durchgeführt. Hierbei waren 30 Zyklen ausreichend um die 24 Fragmente zu assemblieren. Die Stabilität von Bsal-HFv2 und der T4 DNA Ligase erlaubt weitere Assemblierungen bei 45 und 60 Zyklen mit nur geringem Hintergrundrauschen. a) Effizienz der Assemblierung und b) Genauigkeit der Assemblierung versus Zyklenanzahl.

Broschüre

Synthetic Biology – Tools to support design and assembly

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Technical Note:

Breaking through the Limitations of Golden Gate Assembly –
The Co-Evolution of Test Systems, Engineered Enzymes and Understanding Ligase Fidelity

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Produkttabelle

PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS
NEU: NEB Golden Gate Assembly Kit (BsaI-HFv2) E1601S 20 rxns 158€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
E1601L 100 units 421€
NEU: BsaI-HFv2 R3733S 1.000 units 69€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
R3733L 5.000 units 276€
BbsI-HF R3539S 300 units 68€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
R3539L 1.500 units 272€
NEU: Esp3I R0734S 300 units 75€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
R0734L 1500 units 330€
T4 DNA Ligase M0202S 20.000 units 68€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
M0202L 100.000 units 272€
T4 DNA Ligase, conc. M0202T 20.000 units 68€ NEB Shop_icon NEB Info_icon
M0202M 100.000 units 272€

Stand: 08.01.2019

Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.