Genome Editing CRISPR Cas9

Genome Editing

Genome Editing ist die gezielte Veränderung des Genoms in lebenden Zellen und wurde erst durch die Entwicklung neuer molekularer DNA-Schneidetechniken möglich. Die zur Zeit bekannteste und meist diskutierte Technik basiert auf der bakteriellen CRISPR-assoziierten Protein-9 (Cas9) Nuclease aus Streptococcus pyogenes.

Die Cas9 Nuclease ist ein RNA-abhängiges “Restriktionsenzym“, das gezielt Doppelstrangbrüche an definierten DNA-Sequenzen einfügt. Die Sequenzspezifität erhält die Cas9 dabei durch die Bindung von „zielsuchender“ single guide RNA (sgRNA). Die gewünschte Zielsequenz (ca. 20 Nukleotide) der sgRNA muss dabei von jedem Experimentator bestimmt und in das sgRNA-Molekül eingebracht werden. Nach einem Cas9-induzierten Doppelstrangbruch der Wirtszell-DNA fügt das fehlerhafte nichthomologe Endjoining (NHEJ) bei der Reparatur Insertionen und/oder Deletionen (Indels) ein, die den betroffenen Locus zerstören. In Anwesenheit einer homologen Donor-DNA jedoch kann der Doppelstrangbruch alternativ über homologe Rekombination (HDR) repariert werden, wodurch gezielte Editierungen möglich sind.

Genome engineering with Cas9 Nuclease

Sie können sgRNAs und Cas9 in Form von kodierenden Plasmiden in das Zellsystem transfizieren (finden Sie diverse geeignete Vektoren unter www.addgene.org ), Sie injizieren die korrespondierenden sgRNA/Cas9 mRNA oder Sie nutzen NEBs enGen Cas9 NLS Protein im Komplex mit sgRNAs.

crispr cas ansätze

Verschiedene Vorgehensweisen bei CRISPR/Cas9 Gene Editing Experimenten sind möglich:

  • Transfektion von sgRNA/Cas9 Plasmiden
  • Transfektion von sgRNA und Cas9 mRNA
  • oder Co-Transfektion von sgRNA und Cas9 Protein

Jede Variante ist jeweils mit oder ohne HDR Template-Plasmid möglich

Aktuelle Publikationen zeigen, dass sgRNA/Cas9-Protein-Komplexe derzeit als die beste Methode mit geringsten „off-target“-Effekten und höchsten Effizienzen angesehen wird.

NEBs Wissenschaftler konnten zeigen, dass die neue EnGen Cas9 NLS in HEK293-Zellen die höchsten Gene Editing-Effizienzen erzielt.

Wie immer Sie sich entscheiden:

NEB bietet Ihnen eine Reihe hilfreicher und zuverlässiger Reagenzien und Kits, die Ihre CRISPR/Cas9-Experimente unterstützen.

NEB TV – Folge 7

Erfahren Sie in dieser Episode von NEB TV mehr über CRISPR/Cas9 und Synthetische Biologie, wohin sich diese Forschungsbereiche entwickeln und wie sie im Unterricht Anwendung finden.

Cas9 in vivo: Bakterielle Adaptive Immunität

CRISPR Systeme entwickelten sich als ein Weg adaptiver Immunität in Bakterien. Das Verständnis dieser Systeme in vivo ist Voraussetzung für deren Nutzbarmachung in vitro.

Ausgewählte Produkte für den CRISPR/Cas9 Workflow

CRISPR/Cas9 Anwendung PRODUKT Art.Nr.: GRÖSSE PREIS*
Zentrale Komponente des CRISPR/Cas9-Workflows EnGen® Cas9 NLS
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Zentrale Komponente des CRISPR/Cas9-Workflows, ohne NLS EnGen® Cas9
S. pyogenes
M0386S 70 pmol 45 €* In den Shop wechseln Produktinformationen
M0386T 400 pmol 99 €*
M0386M 2000 pmol 320 €*
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Einfügen versetzter Doppelstrangbrüche an genomischen Loci durch zweifachen Einzelstrangbruch (Nick) EnGen® Spy Cas9 Nickase M0650S 70 pmol 45 €* In den Shop wechseln Produktinformationen
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  • Target Anreicherung
EnGen®Spy dCas9 (SNAP-tag®) M0652S 70 pmol 45 €* In den Shop wechseln Produktinformationen
M0652T 400 pmol 99 €*
Synthese von sgRNA EnGen® sgRNA Synthesis Kit
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Weitere ausgewählte NEB Produkte für den Einsatz in CRISPR Workflows:

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NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit
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Stand: 12.07.2018

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