Genome Editing CRISPR Cas9

Herstellung von Homologous Repair Templates

Modifikationen an den Cas9-target Sequenzen kann man auch erreichen, indem man ein sog. “homologous directed repair”  (HDR) Template zum Transfektionsansatz mit sgRNA und Cas9 hinzufügt. Diese HDR Templates sind Plasmide mit 2-3 kb-langen Sequenzen rund um die gewünschte Targetsequenz. So können über die homologen Regionen die gewünschte Mutation, Deletion oder “knock-ins” von Resistenz- oder Reportergenen eingebracht werden.

Die Target Region kann per High-Fidelity PCR an gDNA amplifiziert und dann zur weiteren Bearbeitung in ein Plasmid kloniert werden. Wir empfehlen Ihnen dafür die Q5 High Fidelity DNA Polymerase gefolgt vom PCR Cloning Kit. Zur Bearbeitung und Modifikation der Sequenz empfehlen wir dann NEBuilder HiFi DNA Assembly oder gerichtete Mutagenese mit dem Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit.

HDR Template

Produkttabelle

PRODUKT Art. # GRÖSSE PREIS
Q5® High-Fidelity DNA Polymerase M0491S 100 units 96 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0491L 500 units 424 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Q5® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0493S 100 units 112 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0493L 500 units 508 € In den Shop wechseln Produktinformationen
NEB PCR Cloning Kit E1202S 20 rxns 295 € In den Shop wechseln Produktinformationen
NEB PCR Cloning Kit (Without Competent Cells) E1203S 20 rxns 145 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit E0554S 10 rxns 192 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit (Without Competent Cells) E0552S 10 rxns 132 € In den Shop wechseln Produktinformationen
NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix E2621S 10 rxns 162 € In den Shop wechseln Produktinformationen
E2621L 50 rxns 648 € In den Shop wechseln Produktinformationen
E2621X 250 rxns 2589 € In den Shop wechseln Produktinformationen
NEBuilder® HiFi DNA Assembly Cloning Kit E5520S 10 rxns 190 € In den Shop wechseln Produktinformationen

Stand: 03.01.2019

Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.