Modifikationen an den Cas9-target Sequenzen kann man auch erreichen, indem man ein sog. “homologous directed repair” (HDR) Template zum Transfektionsansatz mit sgRNA und Cas9 hinzufügt. Diese HDR Templates sind Plasmide mit 2-3 kb-langen Sequenzen rund um die gewünschte Targetsequenz. So können über die homologen Regionen die gewünschte Mutation, Deletion oder “knock-ins” von Resistenz- oder Reportergenen eingebracht werden.
Die Target Region kann per High-Fidelity PCR an gDNA amplifiziert und dann zur weiteren Bearbeitung in ein Plasmid kloniert werden. Wir empfehlen Ihnen dafür die Q5 High Fidelity DNA Polymerase gefolgt vom PCR Cloning Kit. Zur Bearbeitung und Modifikation der Sequenz empfehlen wir dann NEBuilder HiFi DNA Assembly oder gerichtete Mutagenese mit dem Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit.
Produkttabelle
| PRODUKT | Art. # | GRÖSSE | PREIS | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Q5® High-Fidelity DNA Polymerase | M0491S | 100 units | 108 € |  |
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| M0491L | 500 units | 474 € | |
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| Q5® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase | M0493S | 100 units | 126 € | |
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| M0493L | 500 units | 570 € | |
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| NEB PCR Cloning Kit | E1202S | 20 rxns | 318 € | |
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| NEB PCR Cloning Kit (Without Competent Cells) | E1203S | 20 rxns | 166 € | |
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| Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit | E0554S | 10 rxns | 218 € | |
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| Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit (Without Competent Cells) | E0552S | 10 rxns | 149 € | |
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| NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix | E2621S | 10 rxns | 172 € | |
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| E2621L | 50 rxns | 688 € | |
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| E2621X | 250 rxns | 2.752 € | |
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| NEBuilder® HiFi DNA Assembly Cloning Kit | E5520S | 10 rxns | 204 € | |
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Stand: 01.01.2023
Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.
