Für die meisten isothermalen Applikationen (inkl. LAMP) empfehlen wir die Bst 2.0 und Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerasen.
Bst 2.0 DNA Polymerase
Die Bst 2.0 DNA Polymerase sowie die Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase sind gentechnisch veränderte, funktionsoptimierte Homologe des Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, Large Fragment und besitzen als solche eine 5´→3´ DNA Polymerase Aktivität bei starkem „strand displacement“, aber keine 5´→3´ Exonuklease Aktivität.
Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase
Zur Verbesserung der Spezifität besitzt die Bst 2.0 WarmStart™ DNA Polymerase eine zusätzliche Aptamer-basierte „Warmstart“-Modifikation: analog zu Hot Start Modifikationen bei PCR Polymerasen inhibieren die Apatamere die Enzymaktivität der Bst 2.0 unterhalb der optimalen Reaktionstemperatur von 50 °C und verhindern so den unspezifischen Einbau von dNTPs bei Raumtemperatur. Die Aptamere dissoziieren automatisch mit Erreichen des Reaktionsoptimums und geben die Enzymaktivität frei.
„Improved Reagents for
Isothermal DNA Amplification“
Original-Artikel von
Dr. Nathan Tanner,
New England Biolabs Inc.
Vergleich mit Wildtyp Bst DNA Polymerase
Strand Displacement Amplification (SDA) des BRCA1-Gens aus HeLa gDNA unter jeweils optimierten Bedingungen. Bst 2.0 ist deutlich prozessiver und schneller und erreicht den Schwellenwert früher als die herkömmliche Wildtyp Bst DNA Polymerase, large Fragement (Abb. links), sogar unter Hochsalz-Bedingungen (Abb. rechts).
Beide Bst 2.0 DNA Polymerasen zeigen gegenüber dem herkömmlichen Wildtypenzym eine deutliche Steigerung in der Geschwindigkeit und den Reaktionsausbeuten, eine größere Salz/Puffer-Toleranz sowie eine erhöhte Thermostabilität – kurz um: „engineered for performance!“
- Verbesserte Designer-Enzyme ``engineered for performance``
- Höhere Geschwindigkeit
- Erhöhte Thermostabilität
- Gesteigerte Salz/Puffer-Toleranz
- Höhere Ausbeuten
Neu: Bst 3.0 DNA Polymerase – optimal für LAMP und RT-LAMP
Die Bst 3.0 DNA Polymerase ist ein in silico-konstruiertes, verbessertes Homolog der Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, Large Fragment. Es wurde von NEB funktionsoptimiert und bietet deutlich verbesserte Performance bei der isothermalen Amplifikation bei gleichzeitiger Steigerung der Reversen Transcriptase Aktivität.
Bst 3.0 DNA Polymerase besitzt eine starke 5´→3´ Polymerase Aktivität sowohl auf DNA als auch auf RNA sowie eine starke „strand displacement“, aber keine 5´→3´ Exonuklease und 3’→5´Aktivität.
Das Enzym ist besonders zuverlässig und deutlich toleranter gegen bekannte Inhibitoren, wie z.B. hohe Salz-Konzentrationen
– kurz um: „engineered for performance!“
Die überlegenen Eigenschaften der Bst 3.0 DNA Polymerase machen das Enzym zur ersten Wahl bei all Ihren (RT)-LAMP Experimenten.
Fast, single-enzyme RT-LAMP can be performed using Bst 3.0 RT-LAMP was performed using indicated DNA polymerase and Jurkat total RNA and primers for two genes (ACTB, left; HMBS2, right). Fastest results were observed with a 2-enzyme system, Bst 2.0 and WarmStart RTx, but robust amplification was also observed using Bst 3.0 without additional RT. Bst LF, Bst 2.0 and competitor enzymes showed highly variable performance, with slow threshold times or reaction failure on one of the two targets.
Sie sind sich nicht sicher, welche Polymerase Sie
für Ihre isothermale Amplifikation benötigen?
Eine Übersicht und Hintergrundinformationen zur Isothermalen Amplifikation haben wir für Sie im aktuellen Spezialkatalog zusammengefasst.
Produkttabelle
| PRODUKT | Art. # | GRÖSSE | INFO | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Bst 2.0 DNA Polymerase | M0537S | 1.600 units |  |
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| M0537L | 8.000 units | |
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| Bst 2.0 DNA Polymerase, conc. | M0537M | 8.000 units | |
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| Bst 2.0 Warm Start DNA Polymerase | M0538S | 1.600 units | |
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| M0538L | 8.000 units | |
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| Bst 2.0 Warm Start DNA Polymerase, conc. | M0538M | 8.000 units | |
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| Bst 3.0 DNA Polymerase | M0374S | 1.600 units | |
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| M0374L | 8.000 units | |
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| Bst 3.0 DNA Polymerase, conc. | M0374M | 8.000 units | |
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| Isothermal Amplification Buffer | B0537S | 6.0 ml | |
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| Passend dazu: | |||||
| Deoxynucleotide Solutions, Mix | N0447S | 8 µmol of each | |
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| N0447L | 40 µmol of each | |
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Stand: 01.01.2024
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