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PCR Aufreinigung

Enzymatische PCR-Aufreinigung mit Exonuclease I und Shrimp Alkaline Phosphatase

Sie wollen Ihr PCR Produkt direkt sequenzieren? Dann reinigen Sie es doch am bequemsten enzymatisch: schnell und verlustfrei. Exonuclease I (Exo I, #M0293) degradiert restliche Primer und die Shrimp Alkaline Phosphatase (rSAP, #M0371) dephosphoryliert verbleibende dNTP.

Die Enzyme können dabei einfach nach der PCR zugegeben werden, sie sind in allen gängigen PCR-Puffern aktiv.

Nach Inaktivierung der Enzyme können Sie direkt mit der Sequenzierung beginnen.

DNA Cleanup Workflow rSAP Exoxo

Abb 1: Workflow-Diagramm. Klicken Sie zum Vergrößern.

Protokoll

1. Zugabe von 0,5 μl Exo I und 1 μl rSAP zu 5 μl PCR-Produkt.

2. Inkubation bei 37 ° C für 15 Minuten.

3. Inaktivieren bei 80 ° C für 15 Minuten.

4. PCR-Produkte sind bereit zur Sequenzierung.

DNA Cleanup Sequencing Results

Abb 2: Sequenzierung mit und ohne enzymatische Aufreinigung. Panel A und C zeigen unbehandelte Proben von 1,5 kb bzw. 150 bp PCR-Produkten. Panel B und D zeigen dieselben PCR-Produkte, die vor der Sequenzierung mit ExoI und rSAP behandelt wurden.

Gel Analysis of PCR Products

Abb 3: Agarosegelanalyse von PCR-Produkten (A: 1,5 kb; B: 150 bp), die entweder mittels Zentrifugen-Säule oder enzymatisch gereinigt wurden. Die Ergebnisse zeigen keinen Produktverlust durch die enzymatische Reinigung.

Ergebnis

Ein PCR-Amplikon von 1,5 kb Länge wurde unter Verwendung von OneTaq® 2X Master Mix mit Standard-Puffer # M0482 gemäß Protokollempfehlung hergestellt. Das PCR-Produkt wurde mit und ohne  Exo I und rSAP Behandlung Sanger-sequenziert (2) und im Gel analysiert (3). Die Behandlung führte zu einer signifikanten Verbesserung der Sequenzqualität ohne Verluste bei der Ausbeute.

Enzymatische Aufreinigung mit Exo I und rSAP ist eine bequeme Methode zur Aufarbeitung von PCR-Produkten für anschließende Sequenzierung oder Analysen. Mit minimaler Arbeitszeit erhalten Sie verlustfrei qualitativ hochwertige Sequenzergebnisse.

Produkttabelle

PRODUKT Art. # GRÖSSE PREIS
Exonuclease I M0293S 3.000 units 70 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0293L 15.000 units 280 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Shrimp Alkaline Phosphatase (rSAP) M0371S 500 units 60 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0371L 2.500 units 240 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0371X 5 x 2.500 units 972 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Passend dazu:
OneTaq® 2X Master Mix with Standard Buffer M0482S 100 rxns 39 € In den Shop wechseln Produktinformationen
M0482L 500 rxns 156 € In den Shop wechseln Produktinformationen
Quick-Load® Purple 1 kb DNA Ladder N0552S 125 gel lanes 60 € In den Shop wechseln Produktinformationen
PCR Marker N3234S 100 gel l. 63 € In den Shop wechseln Produktinformationen
N3234L 500 gel l. 252 € In den Shop wechseln Produktinformationen

Stand: 03.01.2019

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